Analiza cerebrospinalne tečnosti (CSF) je moćan alat za poboljšanje otkrivanja različitih procesa koji se dešavaju u centralnom nervnom sistemu, kao što su krvarenje, upala, infekcija, tumori i druga klinička stanja. Osim toga, serijske procjene jedinjenja u likvoru (kao što su hormoni, lijekovi, neurotransmiteri, biomarkeri, metaboliti i virusi) su podjednako ključne u osnovnim i translacijskim istraživanjima. Volumen CSF u centralnom nervnom sistemu održava se stabilnim kroz sekreciju i apsorpciju.
I. Operativna razmatranja
CSF se obično sakuplja bilo moždanom komorom ili lumbalnom punkcijom. Lumbalna punkcija nosi relativno manji rizik od komplikacija kod ne-primata jer je kod većine vrsta mjesto lumbalne punkcije udaljeno od kraja kičmene moždine. Potrebna je odgovarajuća anestezija i aseptičke tehnike, uključujući pripremu mjesta kao što je brijanje i korištenje sterilnih materijala. Treba koristiti barem sterilne rukavice, špriceve i igle, uzimajući u obzir sterilne hirurške zavjese. Sakupljanje likvora se obično izvodi u bočno ležećim, sternalnim ležećim ili sjedećim položajima, poboljšavajući pristup moždanim komorama ili povećavajući intervertebralni prostor savijanjem vrata ili kralježnice. Veličina i dužina odabrane igle treba da odgovara vrsti i veličini primata koji nisu ljudi. Tehnike, oprema, potrošni materijal koji se koristi tokom procedure i perioperativna njega variraju u zavisnosti od vrste, ciljeva istraživanja i preferencija kliničkog veterinara.
Neki protokoli istraživanja mogu zahtijevati kontinuirano prikupljanje CSF tokom vremena ili prikupljanje uzoraka CSF od neanesteziranih subjekata. Za ove protokole, kontinuirano prikupljanje likvora od budnih rezus majmuna može se postići putem dugotrajno-ugrađenih CSF katetera povezanih sa potkožnim sabirnim portovima.
Autor je uložio sve napore da pronađe najnovije reference u vezi sa ukupnim volumenom likvora, granicama ili preporukama za duralne punkcije, učestalošću prikupljanja, sigurnom zapreminom povlačenja i stopama dopunjavanja likvora. Literatura o ovom aspektu je ograničena za većinu ne-primata. Osim toga, metode prikupljanja variraju, jer ankete članova Udruženja veterinara koji nisu ljudski primati pokazuju da različite institucije uspješno koriste različite metode za prikupljanje likvora. Stoga, autor daje razmatranja i preporuke za prikupljanje likvora na osnovu postojećih najboljih dokaza.
Za referencu, prethodne studije su utvrdile da je prividni volumen CSF kod odraslih mužjaka rezus majmuna (8,0-10,6 kg) 10+/-0,06 mL, sa brzinom protoka CSF-a od 0.018+/-0,003 mL/min. Brzina formiranja likvora kod rezus majmuna kreće se od 28,6-44,2 μL/min. Dalja istraživanja o primatima koji nisu ljudi potrebna su u ovoj oblasti kako bi se olakšao razvoj poučnijih preporuka.
II. Potencijalne štetne reakcije
Iako su komplikacije tokom prikupljanja likvora kod primata koji nisu ljudi rijetke, anatomske varijacije i nepravilne ili neadekvatne tehničke metode mogu dovesti do oštećenja uzorka ili komplikacija kao što su krvarenje, hernija, infekcija, oštećenje moždanog debla, kičmene moždine ili korijena živaca i nelagoda kod životinja. Iako su ove komplikacije rijetke, one mogu ugroziti dobrobit životinja.
Zbog rizika koji su uključeni, CSF bi trebao sakupljati veterinar ili obučeno veterinarsko osoblje. Za neuspješne pokušaje prikupljanja likvora, praksa može varirati. Uobičajena je praksa dopustiti do tri neuspješna pokušaja jedne osobe. Nakon trećeg neuspješnog pokušaja, drugi kvalifikovani pojedinac bi trebao preuzeti. Ako druga osoba ne može prikupiti CSF nakon tri pokušaja, pokušaje treba prekinuti. U međuvremenu, životinja će dobiti odgovarajući analgetički tretman i oporaviti se od anestezije. Promjena mjesta sakupljanja (npr. iz cerebralnih ventrikula u lumbalni) nakon neuspjelih pokušaja često rezultira uspjehom. Ako dođe do neuspjelog pokušaja bez vođenja slike, može se koristiti fluoroskopski-potpomognuto postavljanje igle. Osim što povećava stopu uspješnosti, navođenje slike također može smanjiti stopu traumatskih uboda.
Postoperativno praćenje treba nastaviti sve dok se životinja ne vrati u kavez i ne može zadržati uspravno držanje bez podrške. Monitoring životinja treba da traje najmanje 24 sata ili prema protokolu koji je odobrio Institucionalni komitet za negu i upotrebu životinja (IACUC). Praćenje treba da uključi procjenu osnovnih fizioloških, bihevioralnih i lokomotornih parametara. Posebno treba procijeniti znakove neurološke disfunkcije, uključujući, ali ne ograničavajući se na letargiju, depresiju, komu i znakove pritiska na glavu. Glavobolje i posljedična intrakranijalna hipotenzija nakon prikupljanja likvora nisu neuobičajeni u humanoj medicini. Uzimajući u obzir ovu potencijalnu komplikaciju kod primata koji nisu ljudi, analgetsko liječenje treba obezbijediti tokom operacije i nastaviti 2-3 dana nakon operacije, ili prema potrebi na osnovu postoperativnih zapažanja vezanih za ponašanja povezana s glavoboljom ili bolom u kičmi. Najefikasniji analgetski režim može uključivati sveobuhvatan tretman započet prije operacije.
III. IACUC razmatranja i vođenje evidencije
IACUC bi trebao biti upoznat sa procedurama u vezi sa prikupljanjem likvora i svim mogućim komplikacijama i pregledati ih najmanje jednom godišnje. Sve relevantne informacije, kao što su doze lijekova, preoperativne pripreme, prikupljene količine likvora, učestalost sakupljanja i kratkoročni i dugoročni-oporavak nakon operacije, trebaju biti opisane u IACUC protokolu i na odgovarajući način dokumentirane u medicinskoj dokumentaciji ili laboratorijskim zapisnicima.
Dok CSF može biti ključni podatak u protokolima istraživanja, nepravilne tehnike prikupljanja mogu utjecati na dobrobit životinja. Prilikom dostavljanja protokola potrebno je dati naučno opravdanje za broj i učestalost prikupljanja. Konkretno, IACUC bi trebao pažljivo procijeniti svaki prijedlog koji uključuje prikupljanje CSF-a i razmotriti sljedeće:
1. Da li je prikupljanje CSF-a bitno za postizanje naučnih ciljeva navedenih u protokolu?
2. Da li postoje alternativne metode i manje invazivne metode evaluacije centralnog nervnog sistema (kao što su tehnike snimanja) i ako postoje, da li su one razmotrene?
3. Da li su operateri prošli odgovarajuću obuku i posjeduju li dovoljno vještina?
4. Da li će biti obezbeđeni odgovarajući režimi perioperativne anestezije i analgetika? Treba potražiti konzultacije s veterinarima za laboratorijske životinje u vezi s planovima anestezije i analgetika.
5. Da li prikupljeni volumen likvora uzima u obzir starost i veličinu životinje?
6. Da li su broj i učestalost duralnih punkcija prikladni za životinju i da li je rizik od komplikacija minimiziran? Ako je višestruko prikupljanje likvora dio studije, potrebno je navesti maksimalno vrijeme prikupljanja za svaku životinju.
7. Da li je postoperativni plan praćenja odgovarajući?
8. Da li su razmotrene sve moguće postoperativne komplikacije i da li su navedene sve razumne intervencije, uključujući eutanaziju?
